Поиск

Вход на сайт

Категории раздела

Острый парапроктит [5]
Среди проктологических заболеваний одно из ведущих мнст занимает парапроктит.

Календарь

«  Май 2017  »
ПнВтСрЧтПтСбВс
1234567
891011121314
15161718192021
22232425262728
293031

Статистика


Онлайн всего: 1
Гостей: 1
Пользователей: 0

Медицинская энциклопедия   Э  Ю  Я  У  Х  Ц


     Ультрацентрифугирование

    Ультрацентрифугирование— метод разделения гл. обр. высокомолекулярных соединений, их агрегатов, субклеточных структур и вирусов под действием центробежной силы. В основном ультрацентрифугирование используют в научно-исследовательской работе. Однако аналитическое ультрацентрифугирование может эффективно применяться для постановки и уточнения диагноза, напр. при количественном определении липопротеидов  сыворотки крови с целью установления типа липопротеинемий, для анализа иммуноглобулинов  сыворотки крови, идентификации вирусов и др. Ультрацентрифугирование производят в аналитических или препаративных ультрацентрифугах, скорость вращения ротора в к-рых достигает 80 000 оборотов в мин., а ускорение центробежной силы в сотни тысяч раз превышает ускорение силы земного тяготения. В таких условиях происходит седиментация  не только грубых дисперсий, но и растворенных макромолекул — белков, нуклеиновых кислот, полисахаридов и др. Ротор ультрацентрифуги вращается в вакууме при давлении создаваемом форвакуумным и диффузионным насосами, и приводится в движение чаще всего электрическими моторами. В аналитических ультрацентрифугах в отверстия ротора вставляют так наз. ячейки, представляющие собой металлические цилиндры с центральной вставкой, имеющей секториальную полость и зажатой между двумя кварцевыми стеклами. Объем этой полости составляет 1 мл и меньше. Объем пробирок в препаративных ультрацентрифугах зависит от максимальной скорости вращения ротора. Для наблюдения за процессом седиментации и регистрации границ седиментации в аналитических ультрацентрифугах имеется несколько оптических систем, из к-рых чаще всего используют абсорбционную и рефрактометрическую. Абсорбционная система регистрирует степень поглощения света р-ром в ячейке в зависимости от расстояния от оси вращения. Эту систему применяют при исследовании разбавленных р-ров нуклеиновых к-т  и белков. Шлирен-система позволяет регистрировать градиенты показателей преломления  в виде пиков, соответствующих границам седиментации или флотации. Шлирен-систему применяют для анализа р-ров белков и других высокомолекулярных соединений с концентрацией ок. 0,5%.

   Основными методами аналитического ультрацентрифугирование являются определение скорости седиментации и седиментационного равновесия. В первом случае речь идет о движении границы седиментации от мениска к дну ячейки или границы флотации от дна ячейки к мениску. Этот метод применяют для определения гомогенности веществ, их коэффициентов седиментации или флотации, а также для определения других параметров. При определении седиментационного равновесия при ультрацентрифугирование достигается такое состояние, когда поток вещества за счет седиментации сравнивается с потоком за счет диффузии. Этот метод используют .для определения мол. веса (массы).

   Основными методами препаративного ультрацентрифугирование  являются дифференциальное, зонально-скоростное и равновесное ультрацентрифугирование.  Дифференциальное ультрацентрифугирование  основано на раздельном осаждении частиц на дно пробирок. Для этого подбирают такую скорость и время вращения ротора ультрацентрифуги, чтобы в осадке были самые крупные частицы, а в надосадочной жидкости оставались менее крупные.

   Для препаративного ультрацентрифугирование применяют роторы разных типов. В угловых роторах пробирки вставляются в гнезда под углом к оси вращения, седиментация в этом случае происходит в направлении радиуса на стенки пробирок, а по ним — на дно пробирок.. Эти роторы обычно применяют для дифференциального У. В роторах со свободно подвешенными гильзами с пробирками  гильзы во время вращения ротора принимают горизонтальное положение и седиментация происходит параллельно стенкам пробирок. Такие роторы обычно используют для зонального и равновесного ультрацентрифугирование с градиентами концентрации или плотности поддерживающей среды. Для этих же целей стали использовать так наз. зональные роторы. Эти роторы имеют большую внутреннюю полость, в к-рой создание градиента  и отбор проб происходит при малых скоростях вращения ротора, а разделение осуществляется при максимальных скоростях его вращения.

   В. О. Шпикитер

-->